前言

膽固醇是動物源性食品中常見的成分，而人類過多食用膽固醇則會引發動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病等一系列心血管疾病以及風濕性關節炎、癌癥、糖尿病和帕金森等疾病。據文獻報道，食用植物油中一般不含或含有極少量的膽固醇，而動植物組織中通常都含有甾醇，動物油脂的特征性甾醇是膽固醇。因此，可以通過檢測食用植物油中的膽固醇含量來判定植物油中是否含有動物油脂，從而推斷植物油中是否混有地溝油。

目前常用的膽固醇樣品提取凈化方法主要是皂化法。而采用凝膠滲透色譜（GPC）進行樣品前處理的報道還很罕見。本實驗采用LabTech AutoClean全自動凝膠凈化系統對植物油提取液進行凈化，根據分子排阻色譜原理可有效去除植物油中大分子基體干擾物質，氮吹濃縮后，采用HPLC進行檢測，方法簡單、快捷，能夠很好地去除干擾物對目標物的影響。

1、實驗過程

1.1 儀器與試劑

AutoClean全自動凝膠凈化系統，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm），貨號：Y020207015，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

LC600二元高壓梯度高效液相色譜系統，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

環己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.2 工作液配制

膽固醇標準使用溶液：10mg/mL，溶劑為乙醇，購自壇墨質檢標準物質中心；

膽固醇標準工作液：取1.0mL的標準儲備液于10mL的容量瓶中，用乙醇定容，得到濃度為1.0mg/mL的標樣工作液；

分別移取1.0mg/mL的膽固醇標準工作液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mL各置于1.0mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，得到濃度為10、20、50、100、200μg/mL的標準曲線。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

稱取0.5g食用油于50mL離心管中，加入10mL乙酸乙酯-環己烷（1:1）混合溶液，旋渦震蕩后，將溶液轉移至AutoClean全自動凝膠凈化系統的進樣瓶中。

1.3.2 凝膠凈化處理

將1.3.1中裝有提取液的進樣瓶放置在AutoClean全自動凝膠凈化系統的平臺上，以等體積的乙酸乙酯和環己烷混合溶液為流動相，流速：5mL/min；紫外檢測波長254nm；收集8～16min餾分于60mL收集瓶中，開始凝膠凈化，凈化后將60mL收集瓶移至ET濃縮儀中，40℃氮吹至近干，加入1mL乙醇充分溶解，待檢測。

1.3.3 LC分析測定條件

色譜柱：C18，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm；

流動相：甲醇；

流速：1.0mL/min；

紫外檢測器：檢測波長205nm；

柱溫：40℃；

進樣量：20μL。

2、       實驗結果

圖1 膽固醇標準混合溶液的色譜圖

圖2 大豆油加標色譜圖

圖3 玉米胚芽油加標色譜圖

3、       結論

本實驗使用S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）（北京萊伯帕茲檢測科技有限公司，貨號：Y020207015）對植物油中膽固醇提取液進行凈化，回收率在88.8%~97.9%之間，RSD為1.5%~3.6%，回收率高、重現性良好，說明S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）適用于植物油中膽固醇測定的樣品凈化處理，并且結果穩定、可靠。

4、       參考文獻

[1] GB 5009.128-2016 食品安全國家標準 食品中膽固醇的測定 高效液相色譜法

[2] DB34/T 1765-2012 動物油脂中膽固醇含量的測定 液相色譜串聯質譜法