前言：

碘醚柳胺是鹵化水楊酰苯胺類殺吸蟲藥，可以抑制蟲體線粒體的磷酸化過程，從而阻止蟲體內(nèi)三磷酸腺甙Chemicalbook（ATP）的合成，導(dǎo)致蟲體能量代謝的活力迅速減弱而死亡。它與血液蛋白有很強(qiáng)的親和力，所以藥效在血液中有較長(zhǎng)的持續(xù)時(shí)間，造成藥物在動(dòng)物體內(nèi)富集，而人類食用這些肉類會(huì)使獸藥殘留進(jìn)入人體，從而影響身體健康。

本文參照《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（征求意見稿）》，利用EZsep^TMMAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）進(jìn)行凈化，再用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，建立了一種對(duì)動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的分析方法。

關(guān)鍵詞：

動(dòng)物性食品，碘醚柳胺，固相萃取

1， 實(shí)驗(yàn)過程

1.1 儀器與試劑  

MPREP-SPE08手動(dòng)固相萃取裝置，貨號(hào)：PZ0008，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號(hào)：C020017，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

4500質(zhì)譜系統(tǒng)，SCIEX公司；

EZsep^TMMAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠  ；  

甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

乙腈（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

甲酸，氨水，三乙胺等化學(xué)品均為分析純或以上，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.1 工作液配制

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100mg/瓶，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心 。

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)品適量(相當(dāng)于有效成分約10mg)，精密稱定，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液:移取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液。

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液:碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液。

分別移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)濃度為0.2 μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

取羊腰試樣2g，置于50 mL聚丙烯離心管中，加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液均質(zhì)5min,超聲提取10 min,8000 r/min離心5 min,收集上清液至另一50 mL離心管中殘?jiān)屑?0.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，混勻，取提取液5.0 mL備用待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化

EZsep^TMMAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）用5mL乙腈進(jìn)行活化，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結(jié)束后用5mL乙腈淋洗萃取柱，再用5mL 5%甲酸乙腈洗脫萃取柱，收集洗脫液，以E.T.氮吹濃縮儀，45℃氮?dú)鉂饪s至近干，加2.0 mL甲醇，渦旋混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測(cè)定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

流動(dòng)相：A:0.1%氨水水溶液 B: 甲醇；

流速：0.3mL/min；

進(jìn)樣量：5μL。

表1流動(dòng)相梯度洗脫表

1， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 標(biāo)液色譜圖

圖2碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1， 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)展示了使用EZsep^TMMAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）對(duì)動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量進(jìn)行凈化，通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定，其加標(biāo)回收率在85.0%~93.3%之間，RSD在3.6%，能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。說明EZsep^TMMAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）能很好的完成方法中的凈化工作，并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

2， 參考文獻(xiàn)

1. 《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（征求意見稿）》

表 1   加標(biāo)回收率結(jié)果